磷脂脂肪酸分析中硅胶柱如何活化？

在磷脂脂肪酸（PLFA）分析中，硅胶柱活化是确保磷脂有效分离纯化的关键步骤，具体操作流程如下：

一、硅胶柱活化核心步骤

‌甲醇预处理脱水‌

向硅胶柱（如SPE硅胶柱）中加入2-3倍柱床体积的甲醇（HPLC级），缓慢过柱以消除硅胶表面水分，维持其吸附极性。此操作可提升磷脂回收率，避免磷酸乙醇胺（PE）等组分损失。

预处理后需排出多余甲醇，避免残留溶剂干扰后续分离。

‌惰性溶剂置换‌（若后续使用非极性体系）

用二氯甲烷（DCM）冲洗硅胶柱5-10倍柱体积，去除可能吸附的有机杂质。此步骤对海洋微生物样本尤为重要（如去除脂溶性污染物）。

富媒体流组件将展示相关技术操作示意图

二、活化后硅胶柱的操作规范

‌样品加载条件‌：活化后需保持硅胶柱湿润（如残留少量DCM），立即加入脂质提取物（如氮吹浓缩后的氯仿相）。

‌洗脱梯度控制‌：

‌磷脂分离‌：采用极性递增溶剂体系（如DCM→丙酮→甲醇），依次洗脱中性脂质、糖脂及目标磷脂组分。

‌特异性洗脱‌：对磷脂酰胆碱（PC）、鞘磷脂（SM）等，需优化混合溶剂比例（如二氯甲烷-异丙醇-乙酸甲酯-甲醇-水=25:25:25:11:12）。

三、活化失败的影响与验证

‌未充分脱水‌：导致磷脂回收率下降（如PE、PC损失>30%），因部分硅胶表面水化降低极性吸附力。

‌溶剂残留‌：若甲醇未排净，可能改变洗脱曲线，影响磷脂酰胆碱与鞘磷脂的分离分辨率。

‌验证方法‌：活化后取空白流出液进行GC-MS检测，确认无杂质峰（如脂肪酸甲酯残留）。

视频组件演示硅胶柱活化实操

‌注‌：活化流程需匹配样品类型（如土壤/粪便需增加氯仿净化）；对高盐样本（如海洋采出水），建议DCM预处理后追加丙酮冲洗。